Лабораторная диагностика в системе мероприятий по оздоровлению от лейкоза КРС
Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, которая протекает бессимптомно или проявляется лимфоцитозом и злокачественными образованиями в кроветворных и других органах и тканях.
Источником возбудителя инфекции является зараженный организм животного, представляющий собой среду обитания вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Только в организме животного отмечено сохранение, размножение и накопление этого вируса. Доказано, что местом локализации вируса является лимфоцит.
Передача ВЛКРС восприимчивому крупному рогатому скоту может осуществляться со всеми секретами и экскретами при попадании в них лимфоцитов зараженных вирусом.
Эпизоотический процесс лейкоза является сложным непрерывным процессом передачи ВЛКРС от зараженных к восприимчивым здоровым животным. Имеются два пути передачи вируса: вертикальный (внутриутробный) и горизонтальный (контактный). Заражение происходит обычно горизонтально, то есть в результате ввода здоровых животных в стадо, инфицированное ВЛКРС, и в здоровых стадах – путем ввода в них животных, зараженных вирусом лейкоза.
ВЛКРС может передаваться трансплацентарно с инфицированными лимфоцитами матери благодаря способности лимфоцитов мигрировать в межклеточном пространстве и таким образом преодолевать плацентарный барьер. По некоторым данным, до 20 % телят, зараженных вирусом ВЛКРС от матерей, могут рождаться инфицированными. Вирус лейкоза присутствует в молозиве и молоке инфицированных коров. Инокуляция такого молока или молозива телятам и овцам индуцирует у них инфекцию.
Индуцированная ВЛКРС инфекция характеризуется некоторыми особенностями. Возбудитель персистирует в организме пожизненно в виде провируса, интегрированного в геном лимфоцитов хозяина, при этом свободные зрелые вирионы или их антигены, как правило, отсутствуют. Постоянным признаком инфекции служит продукция специфических антител. Поэтому для диагностики широко применяют непрямые серологические методы исследования, такие, как реакцию диффузионной преципитации (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА).
В настоящее время программы оздоровления хозяйств от лейкоза построены на применении в качестве диагностики серологических методов (РИД и ИФА), предотвращение контакта животных, свободных от вируса лейкоза крупного рогатого скота, с зараженными животными и удаление последних от популяции.
Как показала практика, при таком подходе оздоровление затягивается на годы, так как невозможно выявить всех инфицированных животных, особенно на ранних стадиях заболевания, и изолировать их от здоровых.
Для ускорения полного оздоровления стад от лейкоза целесообразно совместно с РИД и непрямым ИФА использовать методы, выявляющие непосредственно вирус или провирус у инфицированных животных. Перспективной в этом направлении является полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющая выявлять провирусную РНК в крови животного. Проанализировав литературные данные, расположили методы диагностики лейкоза в порядке возрастания чувствительности, точности и специфичности в следующем порядке: РИД, ИФА, ПЦР.
Несмотря на очень высокую чувствительность ПЦР, бывают такие периоды, когда уровень провирусной ДНК минимален. В таких случаях РИД оказывается более информативной. Поэтому имеет смысл методом ПЦР контролировать РИД- и ИФА-негативных особей. При таком комбинированном применении диагностических тестов можно быстро и эффективно оздоровить стадо. С помощью ПЦР выявляют непосредственно провирус, то есть результат анализа не зависит от возраста и состояния животного, поэтому ПЦР можно использовать для разделения телят на инфицированных и здоровых в возрасте от 15 дней до 5 месяцев (в этом возрасте применять РИД не имеет смысла).
Система РИД+ПЦР перспективна при лейкозе КРС, так как обладает рядом преимуществ перед РИД и позволяет с высокой достоверностью одномоментно выявлять максимальное количество инфицированных животных на самых ранних стадиях заболевания. Это существенно сокращает сроки оздоровительных противолейкозных мероприятий. Кроме того, ПЦР применима для обследования молодняка, начиная с 15-дневного возраста.
Процент инфицированных телят к 3-месячному возрасту, по данным ПЦР, практически соответствует проценту РИД-позитивных особей, но в более позднем возрасте (к 3 годам). По-видимому, это свидетельствует о том, что заражение животных происходит в раннем возрасте (трансплацентарно и до 3 месяцев), а первые иммунологические признаки болезни появляются после первой лактации. Таким образом, если в первые недели жизни методом ПЦР разделить телочек на носителей провируса и здоровых, то оздоровить хозяйство можно значительно быстрее.
Высокая чувствительность ИФА в отличие от РИД позволяет быстро и массово исследовать сыворотки крови. С помощью данного метода можно выявлять стада, в которых уровень инфицированности не превышает 1 %. Однако ИФА и РИД не способны дифференцировать материнские антитела у молодых животных от активных антител, продуцирующихся при вирусной инфекции.
Являясь самым чувствительным на сегодняшний день методом обнаружения инфекционных агентов ПЦР не требует иммунологического ответа на проникновение возбудителя в организм хозяина, что дает возможность следить за ранними стадиями развития инфекции. ПЦР позволят выявить фрагменты провирусной ДНК, встроенные в геном инфицированного животного или вирусную РНК, тем самым представляя собой прямой метод диагностики в отличие от непрямых РИД и ИФА.
Зараженных животных первично выявляют с помощью РИД. Одновременно всех телят с 15-дневного до 6-месячного возраста и дополнительно РИД-негативных животных исследуют с помощью ПЦР. Дальнейшее выявление зараженных животных старше 6-месячного возраста проводят методом РИД. А вновь поступающий молодняк, начиная с 15-дневного возраста – ПЦР. Все зараженные животные немедленно удаляются. Критерием благополучия оздоровляемого стада (в хозяйстве, на отделении, ферме, дворе) является получение двух подряд с интервалом в 3 месяца отрицательных результатов в РИД или ИФА всего поголовья старше 6-месячного возраста.
Согласно данных литературы и собственных наблюдений, для успешного оздоровления неблагополучных по лейкозу хозяйств необходимо осуществить следующие специальные и хозяйственные мероприятия.
1. Серологические исследования (РИД или ИФА) животных на лейкоз проводить с 6-месячного возраста с интервалом 3 месяца. Всех серопозитивных животных удалять из стада.
2. В целях повышения эффективности оздоровительных мероприятий и ускоренного выявления инфицированных животных, отрицательно реагирующих в РИД или ИФА, а также телят с 15-дневного возраста исследовать методом ПЦР.
3. При выращивании ремонтного и племенного молодняка первое серологическое исследование (РИД или ИФА) телок на лейкоз проводить в возрасте 6 месяцев, затем в 12-месячном возрасте, перед осеменением и в 6-7-месячной стельности. В ПЦР исследования молодняка начинать с 15-дневного возраста.
4. Стельных коров исследовать на лейкоз в РИД или ИФА за 30 дней до отела и/или через 30 дней после отела. Серопозитивных после отела переводят на откорм или в группу серопозитивных дойных коров. Полученных от них телят, положительных в ПЦР, переводят в группу откорма.
5. Быков-производителей исследовать на лейкоз в РИД или ИФА не менее 2 раз в год, с интервалом 3 месяца. Серопозитивных животных изолировать и передавать на откорм.
6. Новорожденных телят до 7-10-дневного возраста содержать в индивидуальных клетках в профилактории или в боксах вместе с коровами-матерями, а с 15-дневного возраста исследовать в ПЦР, положительно реагирующих передавать на откорм.
7. На заключительном этапе оздоровления (единичные случаи положительно реагирующих) телят, начиная с 15-дневного возраста и взрослых животных, ранее отрицательно реагирующих в РИД или ИФА, исследовать с применением ПЦР. Дальнейшие исследования проводить каждые три месяца.
8. Завозимый племенных животных в период карантина исследовать серологическим методом (РИД, ИФА) и однократно – ПЦР. При отрицательных результатах исследования животных вводить в общее стадо.
9. Животных, в сыворотке которых обнаружены специфические антитела (РИД, ИФА), подвергают гематологическим исследованиям.
10. Животных, показавших положительный результат при исследовании любым методом (РИД, ИФА, ПЦР), считать инфицированными лейкозом, повторные серологические исследования у них не проводятся. Таких животных следует изолировать от здоровых с последующей сдачей на убой или переводом в группу серопозитивных животных.
Критерий благополучия стада – получение двух подряд с интервалом в три месяца отрицательных результатов РИД или ИФА
всего поголовья.